Перевести страницу

Дизайн иследования

Возраст управляется сигналами, распространяющимися через кровь, а сигналы эти, по одной из гипотез, представляют собой информационные сообщения, записанные на РНК и упакованные в мезосомы. Эти информационные "посылки" отправляет эмбрион в гипоталамус будущей матери через общий кровоток. Среди тысяч разнообразных информационных "посылок" сигнал отключения феноптоза теряется. Найти его помогут праймеры, которые способны узнать каждую РНК из этого многотысячного разнообразия. 


2010 - 2011


Идея эксперимента Кушелева, а позднее Золдракса была сформулирована и опубликована нами в 2010-ом году. В 2011-ом году наш сотрудник написал письмо профессору-геронтологу из Израиля.














2014


Ответа мы не получили, но в 2014-ом году группа геронтологов под начальством этого профессора провела эксперимент по нашей схеме: http://subscribe.ru/archive/science.new … 74455.html


Это - победа! Продемонстрирована возможность создания эликсира, возвращающего молодость. Ищите инвесторов, и мы омолодим планету.http://nanoworld.org.ru/topic/818/page/3/


2016


Кушелев: Чтобы вернуть молодость по-настоящему у инвесторов появился конкретный шанс:

http://nanoworld.org.ru/post/83214/#p83214

Виктория Соколик пишет:

Для экспериментального анализа микроРНК экзосом:
Top-quality miRNA studies from pure exosomes
Diagenode
New seamless exosome isolation solution for miRNA studies
Diagenode guarantees the purest isolation of exosomes from biofluids and liquid biopsies for:
High-quality CATS RNA-seq library preparation
High yields of miRNAs from our new superior exosome isolation workflow
Learn more about superior exosome isolation and miRNA-seq


ОБСУЖДЕНИЕ ДИЗАЙНА ЭКСПЕРИМЕНТА 2014-2016


2014


2014.09.03 22:18:33

http://nanoworld.org.ru/topic/818/


Старение является результатом незавершенной эволюции человека, поскольку жизнь напрямую зависела от адаптации к изменяющимся условиям внешней среды. Основная задача программы развития, заложенная в геноме человека, направлена на достижение полового созревания и оставление потомства. Дальнейшее состояние организма уже практически ничем не регламентируется, и ожидаемая продолжительность жизни особи напрямую зависит исключительно от внешних условий жизни.


Согласно современным взглядам, сам процесс старения начинается сразу же после окончания физического роста человека, когда достигается максимальная плотность клеток. Установлено, что в это время в крови начинает циркулировать фактор, или группа факторов, тормозящих рост органов и пролиферацию клеток, в том числе и стволовых. С этого момента начинается процесс, который упрощенно можно назвать «дифференцировкой организма»: происходит адаптация к внешним условиям жизни, элиминируются «неиспользуемые» клетки и ткани. Механизм, регулирующий реорганизацию жизнедеятельности органов и тканей после остановки роста, до сих пор остается практически неизученным. Сложность заключается в том, что рост тканей регулируется не только факторами, циркулирующими в крови, но и механизмами межклеточной «контактной» регуляции, а также нейрональной периферической активностью.


Исследования, проведенные на модели молодых и старых животных с общим кровообращением (гетерохронного парабиоза), показали, что взаимный обмен кровью приводит к обоюдным эффектам у молодых и старых животных. У старых животных после обмена кровью с молодыми на короткий срок улучшается регенерация мышц, генерация новых нервных клеток, когнитивные функции (1, 2). У молодых животных после обмена кровью со старыми тормозятся процессы генерации новых нервных клеток головного мозга, снижаются функции иммунной системы, снижается продукция половых гормонов и у самок наступает период «климакса» (2, 3, 4, 5). Разница состоит в том, что положительные эффекты у старых животных являются временными и быстро проходят, а отрицательные эффекты у молодых животных обладают длительным эффектом и приводят к снижению продолжительности жизни молодых мышей. Показано, что ряд факторов старой крови, в частности Эотаксин, частично коррелируют с возникающими возрастными изменениями у молодых животных (2). Однако элиминация подобных факторов из крови является довольно сложным процессом, поскольку большинство факторов продуцируется клетками большинства тканей организма.


Возрастные изменения активности головного мозга в целом, и ядер гипоталамуса в частности, до сих пор являются практически неизученными. Хотя большинство исследователей склонятся к выводу, что главный регулятор скорости старения расположен именно в структурах головного мозга. В 2013 году Zhang и его коллеги показали, что решающее значение в процессах старения у мышей может иметь гипоталамус. Они показали, NF-kВ-зависимая активация нейронов в гипоталамусе увеличивается с возрастом и, пришли к выводу, что активность гипоталамуса влияет на спад когнитивных и физических функций у мышей. Было также установлено, что IКК-? и NF-kB ингибируют продукцию гонадотропного рилизинг гормона (GnRH). Их исследования показали, что при введении GnRH замедляется процесс старения и улучшаются процессы нейрогенеза у мышей. Авторы пришли к выводу, что: 1) гипоталамус играет программную роль в процессе старения; 2) усиление продукции GnRH в гипоталамусе является возможной тактикой для увеличения продолжительность жизни (6).


В работах сотрудников нашего института было установлено, что слабая электрическая стимуляция отдельных ядер гипоталамуса приводит к улучшению состояния старых животных и увеличению продолжительности жизни [ Дубилей Т.А., 2009 ]. Однако механизм реализации этого воздействия остается до конца неизученным.

В настоящий момент существует несколько подходов к увеличению продолжительности жизни, но все они базируются либо на замещении в организме специфических биологически-важных молекул (например, введение GnRH), либо на использовании неспецифических блокаторов активности клеток (например, использование рапамицина). Но оба подхода имеют один недостаток ? они не устраняют причину старения и требуют проведение постоянных интервенций. Наш подход предполагает использование биотехнологических методов для локального специфического изменения активности транскриптома отдельных ядер гипоталамуса с целью увеличения продукции ряда биологически-важных молекул и увеличения продолжительности жизни.


Целью данного проекта является поиск генов, экспрессируемых в разных ядрах гипоталамуса, «включение» и «выключение» которых с использованием специфических микро-РНК (по отдельности, или в комбинации) будет способствовать улучшению физиологического состояния и увеличению продолжительности жизни экспериментальных животных.


Задачи проекта: проведение скрининга активности транскриптома отдельных ядер гипоталамуса, подбор специфических микро-РНК, введение которых в отдельные ядра гипоталамуса приведет к восстановлению синтеза специфических гормонов и увеличению продолжительности жизни.


Дизайн исследования:


1. Животные - мыши самки линии С57BL/6 возрастом 3 мес (молодые), 10-12 мес (стареющие), 21-23 мес (старые).

2. Экспериментальные модели - выделение отдельных ядер гипоталамуса и скрининг транскриптома (экспрессии генов), стереотаксическое введение микро-РНК стареющим животным, анализ биомаркеров старения, создание гетерохронных парабиотических пар (обычно тестирование факторов индуцирующих старение, экспериментально весьма сложно, поскольку старение наиболее часто используемого в эксперименте животного (мыши) длится 2 года. Поэтому тест-системой для поиска индукторов старения будет модель гетерохронного парабиоза, которая позволяет выявить первые признаки старения молодого партнера в течение 1,5 месяцев сосуществования его со старым, по разработанной нами схеме).

3. Методы - qPCR, sequencing, hybridization in situ, immunohistochemistry, ELISA, проточная цитометрия.

4. Тестируемые показатели:
4.1. Уровень экспрессии генов в разных ядрах гипоталамуса.
4.2. Уровень половых гормонов в плазме крови. 
4.3. Оценка состояния иммунной системы.
4.4. Сбор и криосохранение плазмы крови экспериментальных животных.


https://img-fotki.yandex.ru/get/9067/158289418.23b/0_1396cc_7b990b4b_orig.png
http://img-fotki.yandex.ru/get/5101/158 … 6_orig.png


Литература:

1. Conboy I.M., M.J. Conboy, A.J. Wagers, E.R. Girma, I.L. Weissman, T.A. Rando. Rejuvenation of aged progenitor cells by exposure to a young systemic environment // Nature, Vol 433, 17 February 2005. 
2. Villeda SA, Luo, Mosher KI, Zou B, Britschgi M, Bieri G, Stan TM, Fainberg N, Ding Z, Eggel A, Lucin KM, Czirr E, Park JS, Couillard-Despr?s S, Aigner L, Li G, Peskind ER, Kaye JA, Quinn JF, Galasko DR, Xie XS, Rando TA, Wyss-Coray T. The ageing systemic milieu negatively regulates neurogenesis and cognitive function. Nature. 2011; 477:90–94.http://www.nature.com/nature/journal/v4 … 10357.html . Accessed July 11, 2014.
3. Pishel I, Shytikov D, Orlova T, Peregudov A, Artyuhov I, Butenko G. Accelerated aging versus rejuvenation of the immune system in heterochronic parabiosis. Rejuvenation Res 2012; 15: 239-248. 
4. Butenko GM, Gubrii IB. Inhibition of the immune responses of young adult CBA mice due to parabiosis with their old partners. Exp Gerontol 1980;15: 605-10.
5. Губрий И.Б., Резников А.Г., Демченко В.Н., Бутенко Г.М. Прекращение овариальной цикличности у молодой мыши при парабиозе ее со старой // Бюлл. Эксп. Биол. Мед. ? 1987. ? № 2. ? С. 205?208. 
6. Zhang G, Li J, Purkayastha S, Tang Y, Zhang H, Yin Y, Li B, Liu G, Cai D. Hypothalamic programming of systemic ageing involving IKK-?, NF-?B and GnRH. Nature. 2013; 497:211–216. http://www.nature.com/nature/journal/v4 … 12143.html .


Технология возвращения молодости в общих чертах определилась 1 , 2 , 3


1. Нужно идентифицировать сигнал отключения феноптоза во время беременности.
Для этого нужно:

А. пометить все сигналы эмбриона и выделить помеченные сигналы, попавшие в гипоталамус будущей матери.
Б. прочесть и составить карту сигналов "эмбрион-гипоталамус".
В. выделить из всех сигналов только те, которые отключают феноптоз.

2. Синтезировать сигналы, отключающие феноптоз в промышленных масштабах.




Разработка биотехнологических подходов к продлению жизни.


Skype, 2014-09-11:

[9:54:48] Кушелев Александр Юрьевич: Здравствуйте, Геронтолог. Встреча *****
Всё-таки непонятно, почему нельзя объединить кровеносные системы, например, 10 мышей, соединив их хвостами? Хвосты должны выдержать 
[9:55:41] Кушелев Александр Юрьевич: Было бы очень круто создать полибионт с одной старой мышкой и 9 молодыми. Согласитесь 
[9:56:40] Кушелев Александр Юрьевич: На инвесторов больше всего произведет эффект возврашения репродуктивного возраста.


http://img-fotki.yandex.ru/get/9506/158289418.124/0_ecb00_6ce4a002_orig.jpg


2014.09.16 16:12:06

Кушелев: С увеличением дозы крови беременных, вводимой старым мышам, продолжительность жизни возрастала. Больше доза - меньше "токсичность" 

А исследователи из США показали, что ежедневная замена старой крови на кровь молодых животных приводит к омоложению.

Так что весь вопрос в дозировке. Если дозировка крови беременных для достижения омоложения будет существенно меньше, чем дозировка не беременных, то это - очередная научная победа.

А пока удалось показать, что увеличение дозы в 10 раз вернула сокращенную продолжительность жизни практически к норме. Но при этом доза всё ещё слишком мала для омоложения. Она меньше процента от общего объёма крови.



2014.12.23 19:31:50

http://subscribe.ru/archive/science.new … 10717.html

Самым главным для современной цивилизация является проблема омоложения. Омоложенные люди смогут быстрее поднять цивилизацию на новую ступень развития.

Чтобы вернуть молодость, нужно ... дезинформировать гипоталамус 

Эмбрион во втором триместре беременности передаёт в гипоталамус будущей матери сигнал, отключающий механизм старения. Как его идентифицировать?

Можно перебирать все сигналы эмбриона, которых около 10 000, но это дорогой путь. Удешевить его на полтора-два порядка можно путём анализа только тех сигналов, которые дошли до гипоталамуса будущей матери. Как это реализовать? Нужно прочитать сигналы, поступившие в гипоталамус от эмбриона.


https://img-fotki.yandex.ru/get/15483/158289418.1af/0_107f56_b63e7e08_orig.jpg


Для этого достаточно пометить все сигналы эмбриона, например, люминесцентной меткой. В результате мезосомы (контейнеры, в которых эмбрион отправляет сигналы в т.ч. в гипоталамус) станут видимыми. Меченые мезосомы эмбриона из гипоталамуса будущей матери нужно прочесть методом ПЦР. Сигналов, попавших из эмбриона в гипоталамус будущей матери на полтора-два порядка меньше, чем общее количество сигналов эмбриона. Это и позволит упростить задачу идентификации сигналов, отключающих феноптоз (запрограммированное старение и смерть организма).

http://nanoworld.org.ru/topic/818/page/2/

21.12.2014 9:49:59] Кушелев Александр Юрьевич: Здравствуйте, Геронтолог!
[21.12.2014 9:50:11] Кушелев Александр Юрьевич: Я придумал, как упростить задачу:http://nanoworld.org.ru/topic/972/
[21.12.2014 9:51:25] Кушелев Александр Юрьевич: Можно перебирать все сигналы эмбриона, которых около 10 000, но это дорогой путь. Удешевить его на полтора-два порядка можно путём анализа только тех сигналов, которые дошли до гипоталамуса будущей матери. Как это реализовать? Нужно прочитать сигналы, поступившие в гипоталамус от эмбриона.
Для этого достаточно пометить все сигналы эмбриона, например, люминесцентной меткой. В результате мезосомы (контейнеры, в которых эмбрион отправляет сигналы в т.ч. в гипоталамус) станут видимыми. Меченные мезосомы эмбриона из гипоталамуса будущей матери нужно прочесть методом ПЦР. Сигналов, попавших из эмбриона в гипоталамус будущей матери на полтора-два порядка меньше, чем общее количество сигналов эмбриона. Это и позволит упростить задачу идентификации сигналов, отключающих феноптоз
[18:35:09] Кушелев Александр Юрьевич: Здравствуйте, Геронтолог!
[18:35:31] Геронтолог: Здравствуйте, Александр!
[18:36:16] Кушелев Александр Юрьевич: Мне объяснил Золдракс, что можно пометить все сигналы эмбриона, но только не люминесцентными, а радиоактивными метками. А потом выловить те, что попали в гипоталамус будущей матери.
[18:36:30] Кушелев Александр Юрьевич: И тогда из 10 000 сигналов останутся штук 30 ...
[18:36:38] Кушелев Александр Юрьевич: Их-то и прочесть праймерами
[18:37:04] Кушелев Александр Юрьевич: Это можно сделать гораздо проще, быстрее и дешевле, чем возиться со всеми сигналами эмбриона
[18:37:08] Кушелев Александр Юрьевич: Логично?
[18:38:11] Геронтолог: Логично. Но я не представляю, как это сделать...
[18:38:36] Геронтолог: Я имею в виду - пометить сигналы.
[18:38:41] Кушелев Александр Юрьевич: А можно пометить всего эмбриона?
[18:39:04] Кушелев Александр Юрьевич: А сигналы, которые от него попадут в гипоталамус будущей матери, прочесть с помощью ПЦР
[18:39:17] Геронтолог: Я не знаю таких методов!
[18:39:39] Кушелев Александр Юрьевич: А как Вы читаете и-РНК? Разве не методом ПЦР?
[18:39:58] Геронтолог: Методом ПЦР нельзя пометить сигналы.
[18:40:29] Геронтолог: Я говорю именно о методах мечения - они разные для молекул с разной структурой...
[18:42:50] Кушелев Александр Юрьевич: Золдракс написал, что иРНК можно пометить радиоактивными метками
[18:44:11] Кушелев Александр Юрьевич: Это позволит их обнаружить в гипоталамусе
[18:44:30] Кушелев Александр Юрьевич: И только их и нужно прочитать, т.е. определить нуклеотидную последовательность
[18:45:06] Кушелев Александр Юрьевич: А дальше убрать лишние, оставить только отключение феноптоза
[18:45:19] Геронтолог: У нас сейчас есть замороженные остатки крови беременных самок - если Золдракс знает, кто может пометить имеющуюся в плазме иРНК - я могу передать материал для мечения.
[18:45:35] Кушелев Александр Юрьевич: ОК!
[18:45:41] Кушелев Александр Юрьевич: Сейчас напишу ему
[18:46:27] Кушелев Александр Юрьевич: Но кровь самок вся попадёт в гипоталамус. Это не то. Нужно метить эмбрион
[18:47:09] Кушелев Александр Юрьевич: Из эмбриона только часть сигналов попадёт в гипоталамус. Остальные предназначены для других органов
[18:47:56] Кушелев Александр Юрьевич: А прочесть нужно только те меченные сигналы эмбриона, которые попали в гипоталамус. Их будет мало по сравнению со всеми сигналами эмбриона.
[18:49:46] Геронтолог: В крови находятся "избранные" сигналы - их меньше, но мне кажется, что они как раз и являются "регуляторными".
[18:51:26] Кушелев Александр Юрьевич: В крови эмбриона. Но в крови будущей матери гораздо больше сигналов.
[18:51:56] Кушелев Александр Юрьевич: Зачем нам возиться с сигналами, которые попадут в гипоталамус не от эмбриона?
[18:54:06] Кушелев Александр Юрьевич: В принципе, эксперимент с меченной кровью беременных тоже может дать очень важную информацию. Так что его тоже нужно провести.
[18:54:32] Кушелев Александр Юрьевич: Ведь не факт, что все сигналы, отключающие феноптоз вырабатываются эмбрионом...
[18:54:54] Кушелев Александр Юрьевич: Жду ответа от Золдракса

13 2015.01.20 21:26:35

Привет! Геронтолог спрашивает, как пометить кровь беременных мышей радиоактивными метками, чтобы потом вылавливать сигналы, которые попадут в гипоталамус?
[20:41:29] Zoldrax: Привет! Я не специалист, но предполагаю, что достаточно кормить (поить) изотопами входящими в нуклиотиды.
[20:57:44] Кушелев Александр Юрьевич: Благодарю! Но в этом случае не только эмбрион будет помечен радиоактивной меткой, но и сам гипоталамус...
[20:58:18] Кушелев Александр Юрьевич: Так что нужно как-то "подкормить малыша" 
[20:58:42] Zoldrax: Да. Я ошибся. Тогда не знаю.
[21:00:12 | Изменены 21:00:20] Кушелев Александр Юрьевич: Может инъекция в эмбрион?
[21:00:12] Zoldrax: Это может быть сложнее, чем кажется
[21:01:03] Кушелев Александр Юрьевич: Может быть пометить кровь беременной и сравнить, что дополнительно попало в гипоталамус по сравнению с небеременной?
[21:01:15] Zoldrax: Не факт, что изотоп до секреции информационных РНК в экзосомах доберется.
[21:01:47] Кушелев Александр Юрьевич: А почему саму мезосому нельзя флюоресцентной меткой пометить?
[21:02:02] Zoldrax: Так изотопы будут повсюду. А с беременными парабионтами были проблемы.
[21:02:26] Кушелев Александр Юрьевич: А зачем на парабионты?
[21:02:46] Кушелев Александр Юрьевич: У нас есть замороженная кровь беременных, в которой есть в т.ч. сигнал отключения феноптоза
[21:03:02] Кушелев Александр Юрьевич: Надо посмотреть, что из этой крови попадёт в гипоталамус
[21:03:17] Zoldrax: Я незнаю как пометить экзосому. Это можно когда известен весь их путь. В каких клетках экспрессируются.
[21:03:18] Кушелев Александр Юрьевич: И вычесть из этого набора сигналов то, что бывает без беременности
[21:03:51] Кушелев Александр Юрьевич: Экзосомы метят флюоресцентными метками. Я видел запись. Попробую дать ссылку
[21:05:18] Zoldrax: Ну может быть. Надо разбираться… Я пока не очень представляю насколько окраска существующих эекзосом может повлиять на их избирательность в месте назначения.
[21:05:33] Кушелев Александр Юрьевич: http://elementy.ru/news/432346
[21:05:50] Кушелев Александр Юрьевич: Нам не избирательность нужна
[21:05:54] Кушелев Александр Юрьевич: Нам нужно их видеть
[21:06:23] Кушелев Александр Юрьевич: Если в гипоталамус попали подкрашенные экзосомы, дальше мы анализируем их содержание
[21:06:48] Zoldrax: Вообще очень много экзосом преодолевает гематоэнцефалический барьер. Там специальный механизм переноса есть в этом барьере.
[21:06:59] Кушелев Александр Юрьевич: Это неважно
[21:07:26] Кушелев Александр Юрьевич: Важно, что из 10 000 сигналов эмбриона в гипоталамус будущей матери попадёт всего штук 300 или меньше
[21:07:36] Zoldrax: Ну значит надо покрасить как в статье.
[21:07:46] Кушелев Александр Юрьевич: ОК
[21:08:00] Кушелев Александр Юрьевич: Когда приступим к покраске? 
[21:09:47] Кушелев Александр Юрьевич: ОК!
[21:12:19] Zoldrax: Вообще технологии секвенирования уже почти дошли (осталось совсем чуть-чуть) до того, чтобы правильно их применить к пониманию механизма фактора старения.
[21:12:54] Zoldrax: Жаль что так и нет доказательного эксперимента по блокированию фактора старения у беременных.
[21:13:28] Кушелев Александр Юрьевич: Большие дозы нужны...
[21:14:42] Zoldrax: Я к тому, что нужен доказательный эксперимент, тогда можно убедить народ метить экзосомы.
[21:15:08] Кушелев Александр Юрьевич: А вампирская терапия?
[21:16:45] Zoldrax: Она к беременности не относится. Упрямый народ. Говорят, что мы просто свободные радикалы убираем, вместе со старой кровью. Хотя уже свободнорадикальную теорию старения официально “закрыли”.
[21:17:11] Кушелев Александр Юрьевич: Это точно
[21:18:51] Кушелев Александр Юрьевич: А метить экзосомы есть смысл по-любому. Ведь зная сигналы, которые попадают в гипоталамус, можно их перебирать и выяснить, отключается феноптоз или нет именно таким способом 
[21:20:17] Zoldrax: Да только потом надо как-то отобрать только помеченные, чтобы отсеквенировать и получить последовательность.
[21:20:37] Кушелев Александр Юрьевич: Так помеченные видно 
[21:20:50] Кушелев Александр Юрьевич: Берёшь пинцетом светящуюся экзосому...
[21:21:40] Zoldrax:  Нужен пикопинцет 
[21:22:22] Кушелев Александр Юрьевич: Надо у Геронтолога спросить, как отсеивают меченные экзосомы


2013


Детализация дизайзна эксперимента 2013

http://nano-world-articles.nethouse.ru/page/1024175


2015


2015.01.20 22:11:43

[21:26:10] Zoldrax: Я так понимаю, все очень не просто. Они просто отделить экзосомы из раствора только ультрацентрифугированием в градиенте сахаров могут.
[21:27:44] Кушелев Александр Юрьевич: Может можно пометить так, чтобы и отделить можно было меченные?
[21:52:10] Zoldrax: Если бы они были ограниченного набора последовательностей, то в ультрацентрифуге куски днк с изотопами разделяли. Но это были идентичны и без оболочки.
[21:53:24] Кушелев Александр Юрьевич: Так оболочку убрать - не проблема. Главное - отделить светящиеся экзосомы от остальных
[21:59:39] Zoldrax: Просто был эксперимент над ДНК, когда одинаковые куски с разными изотопами разделяли и разделяющей способности хватило.
[22:00:33] Zoldrax: При разных последовательностях в экзосомах будет непонятно, то ли это изотопы, то ли разные последовательности.
[22:03:10] Кушелев Александр Юрьевич: Нам главное - собрать в кучу светящиеся экзосомы. Дальше всё просто. Они растворяются, а освободившиеся РНК читаются методом ПЦР
[22:04:14] Zoldrax: Да. Сейчас даже без ПЦР можно по одной молекуле.
[22:04:31] Кушелев Александр Юрьевич: Это радует
[22:04:46] Кушелев Александр Юрьевич: Нам главное - уменьшить число сигналов
[22:04:47] Zoldrax: Но общедоступно пока только с ПЦР.
[22:04:52] Кушелев Александр Юрьевич: ОК
[22:07:19] Zoldrax: Так если экзосомы можно выделить из гипоталамуса может достаточно будет набора последовательностей всех экзасом гипоталамуса до беременности и после.
[22:09:20] Кушелев Александр Юрьевич: Во-первых, до беременности там много сигналов. Во-вторых, во время беременности там есть сигналы не из эмбриона. Хотя может быть они тоже относятся к системе отключения феноптоза...
[22:11:51] Zoldrax: Может их и не так много - различий между экзосомами гипоталамуса.
[22:12:54] Кушелев Александр Юрьевич: Может


2015.01.21 11:50:12

Технология возвращения молодости в общих чертах определилась.

1. Нужно идентифицировать сигнал отключения феноптоза во время беременности.
Для этого нужно:

А. пометить все сигналы эмбриона и выделить помеченные сигналы, попавшие в гипоталамус будущей матери.
Б. прочесть и составить карту сигналов "эмбрион-гипоталамус".
В. выделить из всех сигналов только те, которые отключают феноптоз.

2. Синтезировать сигналы, отключающие феноптоз в промышленных масштабах.


2015.02.24 12:20:38

Skype, 2015-02-24:

[11:43:40] Кушелев Александр Юрьевич: Главное - понять, как метить сигнал, который идёт от эмбриона в гипоталамус будущей матери.
[11:44:03] Кушелев Александр Юрьевич: Схему я могу на форуме опубликовать?
[11:44:15] Кушелев Александр Юрьевич: Для магнетрона
[11:44:16] Zoldrax: Проблема показать для начала что сигнал есть и действует.
[11:44:28] Zoldrax: Да схему можно.
[11:45:40] Кушелев Александр Юрьевич: Так пометив как раз и можно показать, что из эмбриона вышло и в гипоталамус вошло.
[11:47:04] Кушелев Александр Юрьевич: Ирина писала, что у них есть замороженная кровь беременных, но это не совсем то, точнчее совсем не то...
[11:47:24] Кушелев Александр Юрьевич: Нужна не вся кровь, а только то, что вышло из эмбриона
[11:47:44] Кушелев Александр Юрьевич: И посмотреть, что из этого войдёт в гипоталамус
[11:48:44] Zoldrax: Я читал, что авторы из nature предполагают малое время жизни фактора старения.
[11:49:53] Кушелев Александр Юрьевич: Это понятно. Но нам нужен сигнал, отключающий механизм старения. И он должен дожить от выхода из эмбриона до входа в гипоталамус 
[11:51:08] Zoldrax: То что из эмбриона сигналы идут разные в том числе в гипоталамус никто не спорит. Спорят с остановкой ими старения. Поэтому и искать не начинают.
[11:52:29] Zoldrax: Вот то что фактор старения в крови, а не случайные поломки после натуровских статей соглашаются.
[11:52:50] Кушелев Александр Юрьевич: Придётся самим поискать...
[11:53:12] Кушелев Александр Юрьевич: Для этого нужно пометить все сигналы эмбриона и отловить те, что попадут в гипоталамус
[11:53:23] Кушелев Александр Юрьевич: Чем метить будем?
[11:53:27] Zoldrax: Самим не получится 
[11:54:10] Zoldrax: Это все равно финансирование другого уровня нужно.
[11:54:23] Кушелев Александр Юрьевич: Почему?
[11:54:59] Кушелев Александр Юрьевич: Нужно достать некоторое количество эмбрионов, например, замороженных.
[11:55:05] Кушелев Александр Юрьевич: Пометить их целиком.
[11:55:21] Кушелев Александр Юрьевич: Разморозить, и сделать инъекцию мышам
[11:55:43] Кушелев Александр Юрьевич: А потом исследовать гипоталамус в поисках меченных сигналов
[11:56:16] Кушелев Александр Юрьевич: В принципе дело не очень затратное
[11:56:51] Кушелев Александр Юрьевич: Конечно, для получения статистики, придётся повторять на большом количестве, но первый результат можно и на паре мышек получить
[11:56:55] Zoldrax: Это не серьезно. У нас даже доказать эффект остановки старения не удалось.
[11:57:56] Zoldrax: А тут сложная цепочка условий, которые должны совпасть. Начиная от того, что сигнал не портится при заморозке.
[11:58:43] Кушелев Александр Юрьевич: Да. Пока удалось увидеть зависимость продолжительности жизни от дозы инъекций. Маленькие дозы сокращают жизнь сильно, большие практически не сокращают
[11:59:18] Кушелев Александр Юрьевич: Можно попробовать и без заморозки. Но тут нужно работать быстро, т.к. сигнал может испортиться за десятки минут
[12:00:17] Кушелев Александр Юрьевич: Интересно, а пытался ли кто-нибудь пересаживать эмбрионы?
[12:00:26] Кушелев Александр Юрьевич: Пометил, и пересадил...
[12:00:35] Кушелев Александр Юрьевич: Тогда задержки во времени вообще не будет
[12:00:45] Кушелев Александр Юрьевич: Или ещё круче
[12:00:58] Кушелев Александр Юрьевич: Пометить эмбрион прямо в утробе
[12:01:11] Кушелев Александр Юрьевич: А дальше ловить метки в гипоталамусе
[12:01:30] Кушелев Александр Юрьевич: Может быть так уже кто-то делал?
[12:01:31] Zoldrax: На сколько я понимаю, то с могзгом пока эмбрионы не связывали.
[12:02:00] Кушелев Александр Юрьевич: Откуда-то узнали, что некоторые сигналы эмбриона попадают в гипоталамус будущей матери
[12:02:21] Zoldrax: Есть карта взаимодействия между разными участками мозга.
[12:02:24] Кушелев Александр Юрьевич: Кстати, может быть есть готовая таблица, которую нам нужно просто проанализировать в новом свете?
[12:02:43] Кушелев Александр Юрьевич: А есть карта взаимодействия "эмбрион-гипоталамус будущей матери"?
[12:02:55] Zoldrax: Например куда попадают метки из гипоталамуса и наоборот.
[12:03:15] Zoldrax: Но я видел только для мозг-мозг.
[12:03:54] Кушелев Александр Юрьевич: Давай поищем для "эмбрион-гипоталамус"
[12:04:02] Кушелев Александр Юрьевич: Может быть это засекречено?
[12:04:41] Zoldrax: Думаю не делали. Был проект карта мозга для него все и сделали.
[12:05:41] Кушелев Александр Юрьевич: А откуда узнали, какие сигналы попадают из эмбриона в гипоталамус?
[12:07:04] Zoldrax: Я не разбирался. Уже не помню.
[12:09:25] Кушелев Александр Юрьевич: Давай с этого и начнём 
[12:10:37] Zoldrax:  )


2015.02.25 15:56:46

Skype, 2015-02-25:

[14:02:38] Кушелев Александр Юрьевич: Тебе удалось найти таблицы сигналов "эмбрион-гипоталамус"?
[14:04:09] Zoldrax: Нет. Сразу не увидел. Увидел несколько статей про белок KISS-1 , он обноруживается в гипоталамусе на первом триместре и в молодых организмах.
[14:04:27] Zoldrax: Доказана противометостазная его активность.
[14:04:40] Кушелев Александр Юрьевич: Уже интересно
[14:05:02] Кушелев Александр Юрьевич: А что, никто не догадался пометить эмбрион?
[14:05:41] Кушелев Александр Юрьевич: Там этих сигналов, попавших из эмбриона в гипоталамус должно быть больше 10
[14:06:04] Кушелев Александр Юрьевич: И скорее всего главные сигналы - информационные РНК в экзосомах
[14:06:06] Zoldrax: Как я понял, они мышь кунают в жидкий азот, а потом находят, что KISS-1 в гипоталамусе был 
[14:06:17] Кушелев Александр Юрьевич: Да...
[14:06:37] Кушелев Александр Юрьевич: Это когда они такую методу стали использовать?
[14:06:59] Кушелев Александр Юрьевич: Я её описывал лет 15 назад в рассказе "Эфиродактиль"
[14:07:19] Zoldrax: Статья 2014 года.
[14:07:28] Zoldrax: Когда метода не знаю.
[14:07:42] Кушелев Александр Юрьевич: Наверное, сами додумались.
[14:08:07] Кушелев Александр Юрьевич: Но это грубо
[14:08:20] Кушелев Александр Юрьевич: Нужно метить эмбрион, причём прямо в утробе
[14:08:33] Zoldrax: Ну явно что не авторы статьи метод придумали, они его описывают как общепринятый 
[14:08:42] Кушелев Александр Юрьевич: Понятно
[14:09:06] Кушелев Александр Юрьевич: Если уж на видео могут эмбрион записывать, то пометить его наверняка можно
[14:09:15] Кушелев Александр Юрьевич: Весь вопрос, чем?
[14:10:03] Zoldrax: Да раз карту мозга и как там что циркулирует сделали, наверно и эмбрион можно.
[14:10:09] Кушелев Александр Юрьевич: Что прилипнет к экзосомам и продержится до гипоталамуса?
[14:10:42] Кушелев Александр Юрьевич: У меня стойкое подозрение, что это уже давно сделано
[14:11:09] Zoldrax: Я кидал статью про спец механизм транспорта экзосом через гематоэнцефалический барьер?
[14:11:17] Кушелев Александр Юрьевич: Нет
[14:12:05] Кушелев Александр Юрьевич: Пометить эмбрион и отследить меченные экзосомы в гипоталамусе - сравнительно дешёвая работа. Не верится, что никто этого не делал
[14:12:25] Zoldrax: Это надо у спецов спрашивать...
***
[14:13:21] Кушелев Александр Юрьевич: Она говорила, что поищет научные статьи на эту тему
[14:15:18] Кушелев Александр Юрьевич: Нужно узнать полный набор сигналов гипоталамуса без беременности и в период беременности
[14:15:25] Кушелев Александр Юрьевич: Вычесть один из другого...
[14:16:51] Кушелев Александр Юрьевич: Наверняка набор сигналов гипоталамуса изучали и во время беременности
[14:17:36] Кушелев Александр Юрьевич: Сигналы гипоталамуса во время беременности добавляет не только эмбрион...
[14:17:57] Кушелев Александр Юрьевич: Поэтому и надо бы пометить эмбрион и отследить, что попадёт в гипоталамус
[14:18:15] Кушелев Александр Юрьевич: "Зачем платить больше"?
[14:18:20] Zoldrax: Есть исследования экзосом во время беременности, но в крови матери.
[14:18:28] Кушелев Александр Юрьевич: Это понятно
[14:18:48] Кушелев Александр Юрьевич: А нам нужно именно пересечение эмбриона и гипоталамуса будущей матери
[14:19:28] Кушелев Александр Юрьевич: В этом случае мы будем работать с минимумом сигналов
[14:20:27] Кушелев Александр Юрьевич: Где-то я видел "светящихся мышей"
[14:20:35] Кушелев Александр Юрьевич: Нам нужно "засветить эмбриона"
[14:20:39] Zoldrax: Дело в том, что получение геномных данных - очень отработанный процесс. А метки и сигналы - это новый эксперимент.
[14:21:09] Кушелев Александр Юрьевич: Так с метками и сигналами работают уже десятки лет
[14:21:15] Кушелев Александр Юрьевич: Это тоже отработанная методика
[14:21:29] Zoldrax: Да, но ...
[14:21:49] Кушелев Александр Юрьевич: "Хочешь жить вечно? - Накорми мышей!" 
[14:22:40] Кушелев Александр Юрьевич: "Перехват сигналов" - это и есть эликсир
[14:23:41] Кушелев Александр Юрьевич: Если в гипоталамусе будут копаться со скоростью 1 белок в год, то в лучшем случае докапаются лет за 10-15
[14:24:06] Кушелев Александр Юрьевич: А если устроить перехват всех сигналов эмбрион-гипоталамус, то проблема решится сразу
[14:24:26] Zoldrax: Мы даже точно не знаем экзосомы ли это? Гипотетически мне экзосомы нравятся в качестве сигнала, но это какое-то гадание.
[14:24:38] Кушелев Александр Юрьевич: Да какая разница?
[14:24:58] Кушелев Александр Юрьевич: Если пометить весь эмбрион, то в гипоталамусе засветятся все сигналы
[14:25:12] Кушелев Александр Юрьевич: Нужно метить тем, что метит все типы сигналов
[14:26:07] Zoldrax: Светиться могут и метаболиты после сложных преврвщений, а могут потерять светимость. Т.е. нужно знать что искать 
[14:27:30] Кушелев Александр Юрьевич: На первом этапе намылить эмбрион радиоактивным (чем?)
[14:28:49] Zoldrax: Да там все разлетится по всему взрослому организму, мне кажется.
[14:28:58] Кушелев Александр Юрьевич: Почему?
[14:29:07] Кушелев Александр Юрьевич: Тритий может и разлетится, а углерод?
[14:29:24] Кушелев Александр Юрьевич: Углерод похоже во все сигналы входит
[14:29:47] Zoldrax: Ну там же метаболизм эмбриона.
[14:30:00] Кушелев Александр Юрьевич: Конечно, что-то уйдёт, но мы же количественно можем отследить?
[14:30:46] Кушелев Александр Юрьевич: Время передачи сигнала из эмбриона в гипоталамус скорее всего - минуты
[14:30:56] Zoldrax: Ну я думаю, что метаболизм по сранению с сигнальной системой массово на порядки отличается.
[14:31:12] Кушелев Александр Юрьевич: Через минуты можно заморозить и смотреть, что в гипоталамусе светится
[15:41:23] Кушелев Александр Юрьевич: У тебя есть аппаратура, чтобы работать с мышами и радиоактивными метками?
[15:42:10] Кушелев Александр Юрьевич: В Киеве, как я понял, от мышей осталась только замороженная кровь беременных. Надо спросить о текущем поголовье "мелкого лабораторного скота"